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时间:2023-09-26 来源:贝博app体育电竞

  与BCA试剂构成紫色彩的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与规范曲线比照,即可核算待测蛋白的浓度。

  BCA 法快速活络、安稳牢靠,对不一样的品种蛋白质检测的变异系数十分小。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中,常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测成果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。试验中,若发现样品稀释液或裂解液自身布景值较高,可用BestBio贝博Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

  1. BCA工作液制造。依据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)制造适量BCA工作液,充沛混匀。

  5.以蛋白含量(mg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出规范曲线. 样品测定:将待测蛋白样品用去离子水稀释至恰当浓度,取20ml样品,参加200m

  BCA工作液,混匀后37℃放置30分钟,然后以0号孔为对照,测定样品吸收值A562。7. 依据测得的吸收值,在规范曲线上即可查得样品的蛋白含量。

  由于BCA法测定时色彩会跟着时刻的延伸不断加深,而且显色反响的速度和温度有关,所以除非准确操控显色反响的时刻和温度,不然如需准确测定,每次测定都需重做规范曲线。若需得到更为准确的蛋白浓度成果,每个蛋白梯 度和样品均需做复孔。

  3.若测定规范曲线时发现跟着规范品浓度的添加吸光度或色彩无明显改变,原因可能是样品中含有严峻搅扰BCA法测定蛋白浓度的物质

  BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质具体的兼容性,拜见附件BCA蛋白浓度测定兼容性表。4. 试剂A 与试剂B 用应密闭保存。5.